10X TBE Elektroforez Tampon Protokolü veya Tarifi

TBE ve TAE moleküler biyolojide tampon olarak kullanılır. elektroforez nükleik asitlerin. Tris tamponları, DNA elektroforezinde olduğu gibi hafif bazik pH koşulları altında kullanılır, çünkü bu DNA'yı tutar Çözeltide çözünür ve protondan arındırılmış, böylece pozitif elektroda çekilecek ve bir jel. EDTA çözelti içinde bir bileşen olduğu için bu yaygın kenetleme maddesi nükleik asitleri enzimlerin bozunmasından korur. EDTA, numuneyi kirletebilecek nükleazlar için kofaktör olan iki değerlikli katyonları şelatlar. Bununla birlikte, magnezyum katyonu DNA polimeraz ve kısıtlama enzimleri için bir kofaktör olduğundan, EDTA konsantrasyonu bilerek düşük tutulur (yaklaşık 1 mM konsantrasyonda).

Çözeltiyi sterilize etmeniz gerekmez. Yağış bir süre sonra meydana gelse de, stok çözeltisi hala kullanılabilir durumdadır. PH değerini, pH metre ve damla damla konsantre madde kullanarak ayarlayabilirsiniz. hidroklorik asit (HCl). TBE tamponunu oda sıcaklığında saklamak iyidir, ancak çökelmeyi artıracak parçacığı çıkarmak için stok çözeltisini 0.22 mikronluk bir filtreden süzmek isteyebilirsiniz.

instagram viewer

Kazara 5X veya 10X stok çözeltisi kullanmak, düşük ısı üreteceğinden size kötü sonuçlar verecektir. Size düşük çözünürlük vermenin yanı sıra, numune zarar görebilir.

TBE ve TAE yaygın elektroforez tamponları olmasına rağmen, diğer seçenekler lityum borat tamponu ve sodyum borat tamponu dahil düşük molariteli iletken çözeltiler için. TBE ve TAE ile ilgili sorun, Tris bazlı tamponların elektroforezde kullanılabilecek elektrik alanını sınırlamasıdır, çünkü çok fazla yük kaçak bir sıcaklığa neden olur.

instagram story viewer