TAE tamponu, Tris bazı, asetik asit ve EDTA'dan (Tris-asetat-EDTA) oluşan bir çözeltidir. Tarihsel olarak agaroz jel için kullanılan en yaygın tampon maddedir. elektroforez kaynaklı DNA ürünlerinin analizinde PCR amplifikasyon, DNA saflaştırma protokolleri veya DNA klonlaması deneyler.
Bu tampon düşük iyonik mukavemete ve düşük tamponlama kapasitesine sahiptir. Büyük (> 20 kilobaz) DNA parçalarının elektroforezi için en uygun olanıdır ve daha uzun (> 4 saat) jel çalışma süreleri için sık sık değiştirilmesi veya yeniden dolaştırılması gerekir. Bunu aklınızda tutarak, tamponun birkaç partisini oluşturmayı düşünebilirsiniz.
Tamponun yapılması kolay olduğu ve adımların hızlı bir şekilde gerçekleştirilebildiği göz önüne alındığında, bir seferde birden fazla parti yapmak özellikle zaman alıcı veya zor olmamalıdır. Aşağıdaki talimatları kullanarak, TAE tamponunun oluşturulması sadece 30 dakika sürmelidir.
TAE Tamponu İçin Gerekenler
TAE arabelleğini yapmak sadece hızlı ve basit bir talimat seti gerektirdiğinden, bunun için gereken malzeme sayısı aşırı değildir. Sadece EDTA (etilendiamintetraasetik asit) disodyum tuzu, Tris bazı ve glasiye asetik aside ihtiyacınız olacak.
Tamponun yapılması, ayrıca uygun şekilde bir pH metre ve kalibrasyon standartları gerektirir. Ayrıca, 600 mililitre ve 1500 mililitre beher veya şişe ve dereceli silindirlere ihtiyacınız olacak. Son olarak, deiyonize suya, karıştırma çubuklarına ve karıştırma plakalarına ihtiyacınız olacak.
Aşağıdaki talimatlarda, formül ağırlığı (her bir elementin atom kütlesi atom sayısıyla çarpılır, daha sonra her birinin kütlesi birbirine eklenir) FW olarak kısaltılır.
EDTA için Stok Çözümü Hazırlama
Bir EDTA çözümü önceden hazırlanır. PH yaklaşık 8.0'a ayarlanıncaya kadar EDTA tamamen bir çözeltiye girmeyecektir. 500 mililitre stok için 0.5 M (molarite veya konsantrasyon) EDTA çözeltisi, 93.05 gram EDTA disodyum tuzunu (FW = 372.2) tartın. 400 mililitre deiyonize su içinde çözün ve pH'ı sodyum hidroksit (NaOH) ile ayarlayın. Çözeltiyi 500 mililitrelik nihai bir hacme tamamlayın.
Stok Çözümünüzü Oluşturun
242 gram Tris baz (FW = 121.14) tartılarak ve yaklaşık 750 mililitre deiyonize su içinde çözülerek konsantre (50x) bir TAE stok çözeltisi hazırlayın. Dikkatlice 57.1 mililitre buzul asit ve 100 mililitre 0.5 M EDTA (pH 8.0) ekleyin.
Bundan sonra, çözeltiyi 1 litrelik bir nihai hacme ayarlayın. Bu stok çözeltisi oda sıcaklığında saklanabilir. Bu tamponun pH'ı ayarlanmamıştır ve yaklaşık 8.5 olmalıdır.
TAE Tamponunun Çalışma Solüsyonunu Hazırlayın
1x TAE tamponunun çalışma çözeltisi, stok çözeltinin deiyonize su içinde 50x seyreltilmesiyle yapılır. Nihai çözünen konsantrasyonları 40 mM (milimolar) Tris-asetat ve 1 mM EDTA'dır. Tampon artık bir agaroz jeli çalıştırmak için kullanıma hazırdır.
Paketleme
TAE tamponu için yukarıdaki malzemelerin hepsine sahip olduğunuzdan emin olmaya başlamadan önce envanteri kontrol edin. Tedarik personeliniz stokta ihtiyacınız olan tüm ürünlere sahip olup olmadıklarını size söyleyebilmelidir. Sonunda prosedürün ortasında bir şey kaçırmak istemezsiniz.