Fosfat Tamponlu Salin (PBS) Nasıl Yapılır

Fosfat tamponlu salin (PBS) bir tampon çözeltisi Bu genellikle immünohistokimyasal (IHC) boyama için kullanılır ve sıklıkla biyolojik araştırmalarda kullanılır. PBS, sodyum hidrojen fosfat, sodyum klorür ve bazı durumlarda potasyum klorür ve potasyum dihidrojen fosfat içeren su bazlı bir tuz çözeltisidir.

İmmünohistokimya, bir hücrenin hücrelerindeki proteinler gibi antijenlerin saptanması sürecini ifade eder. biyolojik olarak antijenlere bağlanan antikorlar prensibini kullanarak doku kesiti Dokular. İmmünofloresan boyama, ilk immünohistokimyasal boyama yöntemiydi.

Antijenler, aşağıdakilerden dolayı floresan boyalar kullanılarak antikorlarla konjüge edildiğinde görünür hale gelir antijen-antikor bağlanma reaksiyonu. Bu işlem, floresan mikroskop altında belirli bir dalga boyunun heyecan verici ışığı ile aktive edildiğinde gerçekleşir.

Çözeltilerin ozmolaritesi ve iyon konsantrasyonları insan vücudununkilerle eşleşir - izotoniktir.

PBS'yi çeşitli şekillerde hazırlayabilirsiniz. Birden çok formül var. Bazıları potasyum içermez, diğerleri kalsiyum veya

Bu tarif nispeten kolaydır. 10X PBS stok çözeltisi (0.1M) içindir. Bununla birlikte, 1X stok çözeltisi yapabilir veya bu 10X tarifiyle başlayabilir ve 1X'e seyreltebilirsiniz. Tüm işlem yaklaşık 10 dakika sürer ve Tween ekleme seçeneği de sağlanır.

• Sodyum fosfat monobazik (susuz)
• Sodyum fosfat dibazik (susuz)
• Sodyum klorit
• Tekneleri ölçeklendirme ve tartma
• Manyetik karıştırıcı ve karıştırma çubuğu
• Kalibre edilmiş bir pH probu ve pH'ı ayarlamak için uygun çözümler
• 1L hacimsel şişe
• Ara 20 (isteğe bağlı)

1. 10.9g susuz sodyum fosfat dibazik (Na2HP04), 3.2g susuz sodyum fosfat monobazik (NaH2PO4) ve 90g sodyum klorür (NaCl) tartılır. 1L damıtılmış suyun hemen altında çözün.
2. PH'ı 7.4'e ayarlayın ve çözeltiyi 1 L'lik nihai bir hacme kadar yapın.
3. Kullanmadan önce 10X seyreltin ve gerekirse pH'ı yeniden ayarlayın.
4. 1L çözeltiye 5 mL Tween 20 ekleyerek yüzde 0,5 Tween 20 içeren bir PBS çözeltisi yapabilirsiniz.

PBS çözeltisini yaptıktan sonra tamponu oda sıcaklığında saklayın.

Susuz reaktifler ikame edilebilir, ancak eklenen su moleküllerini barındırmak için her birinin uygun kütlesini yeniden hesaplamanız gerekir.

Fosfat tamponlu salinin birçok kullanımı vardır, çünkü izotoniktir ve çoğu hücre için toksik değildir. Maddeleri seyreltmek için kullanılabilir ve genellikle hücre kaplarını durulamak için kullanılır. PBS, biyomolekülleri kurutmak için çeşitli yöntemlerde bir seyreltici olarak kullanılabilir, çünkü içindeki su molekülleri, örneğin madde - protein etrafında yapılandırılacaktır. "Kurutulur" ve katı bir yüzeye sabitlenir.

PH, hücrelerin yok edilmesini önlemek için sabit ve tutarlı kalır.

Maddeye bağlanan ince su filmi denatürasyonu veya diğer konformasyonel değişiklikleri önler. Karbonat tamponları aynı amaç için kullanılabilir ancak daha az etkilidir.

PBS ayrıca ölçüm yaparken bir referans spektrumu almak için de kullanılabilir. protein elipsometride adsorpsiyon.