Fosfat Tamponlu Tuzlu Su veya PBS Çözeltisi

PBS veya fosfat tamponlu salin bir tampon çözelti bu özellikle değerlidir, çünkü insan vücudu sıvılarının iyon konsantrasyonunu, ozmolaritesini ve pH'sını taklit eder. Başka bir deyişle, insan çözümlerine izotoniktir, bu nedenle biyolojik, tıbbi veya biyokimyasal araştırmalarda hücre hasarına, toksisiteye veya istenmeyen çökelmeye neden olma olasılığı daha düşüktür.

PBS çözeltisi hazırlamak için birkaç tarif vardır. Temel çözelti su, sodyum hidrojen fosfat ve sodyum klorit. Bazı preparatlar potasyum klorür ve potasyum dihidrojen fosfat içerir. EDTA ayrıca topaklanmayı önlemek için hücresel preparatta ilave edilebilir.

Fosfat tamponlu salin ideal değildir çözeltilerde kullanım için içeren iki değerlikli katyonlar (Fe²⁺, Zn²⁺) çünkü yağış meydana gelebilir. Bununla birlikte, bazı PBS çözeltileri kalsiyum veya magnezyum içerir. Ayrıca, fosfatın enzimatik reaksiyonları engelleyebileceğini unutmayın. DNA ile çalışırken bu potansiyel dezavantajın bilincinde olun. PBS fizyolojik bilim için mükemmel olmakla birlikte, örnek etanol ile karıştırılırsa PBS tamponlu bir numunedeki fosfatın çökebileceğini unutmayın.

1X PBS'nin tipik bir kimyasal bileşimi, 10 mM PO'luk bir nihai konsantrasyona sahiptir.₄³⁻137 mM NaCl ve 2.7 mM KCI. İşte çözeltideki son reaktif konsantrasyonu:

Amacınıza bağlı olarak 1X, 5X veya 10X PBS hazırlayabilirsiniz. Birçok kişi sadece PBS tampon tabletleri satın alır, damıtılmış suda çözer ve pH'ı gerektiği gibi ayarlar hidroklorik asit ile veya sodyum hidroksit. Ancak, çözümü sıfırdan yapmak kolaydır. İşte 1X ve 10X fosfat tamponlu salin için tarifler:

1. Reaktif tuzlarını 800 ml distile su içinde çözün.
2. Hidroklorik asit ile pH'ı istenen seviyeye ayarlayın. Genellikle bu 7.4 veya 7.2'dir. PH değerini ölçmek için bir pH metre kullanın, pH kağıdını veya diğer kesin olmayan tekniği değil.
3. 1 litrelik nihai hacim elde etmek için damıtılmış su ekleyin.

Sterilizasyon bazı uygulamalar için gerekli değildir, ancak sterilize ediyorsanız, çözeltiyi alikotlara dağıtın ve otoklavı 15 psi'de (1,05 kg / cm) 20 dakika boyunca otoklavlayın.²) veya filtre sterilizasyonu kullanın.

Fosfat tamponlu tuzlu su oda sıcaklığında saklanır. Buzdolabında da olabilir, ancak 5X ve 10X çözeltisi soğutulduğunda çökelir. Konsantre bir çözeltiyi soğutmanız gerekiyorsa, önce tuzların tamamen çözündüğünden emin olana kadar oda sıcaklığında saklayın. Yağış meydana gelirse, sıcaklığın ısıtılması onları çözeltiye geri getirecektir. Soğutmalı çözeltinin raf ömrü 1 aydır.

10X, 1X veya normal bir çözelti yapmak için seyreltilebilen konsantre veya stok bir çözeltidir. Normal bir seyreltme yapmak için 5X'lik bir çözelti 5 kez seyreltilmeli, 10X'lik bir çözelti 10 kez seyreltilmelidir.

10X PBS çözeltisinden 1 litrelik 1X PBS çalışma çözeltisi hazırlamak için 900 ml suya 100 ml 10X çözeltisi ekleyin. Bu sadece çözeltinin konsantrasyonunu değiştirir, reaktiflerin gram veya molar miktarını değiştirmez. PH etkilenmemelidir.

Bir başka popüler tampon çözeltisi Dulbecco'nun fosfat tamponlu salin veya DPBS'sidir. PBS gibi DPBS, biyolojik araştırma ve 7.2 ila 7.6 pH aralığında tamponlar için kullanılır. Oda sıcaklığında saklanabilir. Dulbecco çözeltisi daha düşük bir fosfat konsantrasyonu içerir. 8.1 mM mM fosfat iyonu iken, düzenli PBS 10 mM fosfattır. 1x DPBS'nin tarifi:

Tuzları 800 mL su içinde çözün. Hidroklorik asit kullanarak pH'ı 7.2 ila 76'ya ayarlayın. Nihai hacmi su ile 1000 mL'ye ayarlayın. 121 ° C'de 20 dakika otoklavlayın.

• Dulbecco, R.; vd. (1954). "Plak oluşumu ve saf çizgilerin poliomyelit virüsleri ile izolasyonu". J. Tecrübe. Med. 99 (2): 167–182.
• "Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS." Soğuk Kaynaklı Liman Protokolleri (2006). Cold Spring Harbor Laboratuar Yayınları.